产品货号：
MT0129
中文名称：
高效T7 RNA聚合酶
英文名称：
T7 RNA Polymerase
产品规格：
10000U
发货周期：
1～3天
产品价格：
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高效T7 RNA聚合酶对T7噬菌体启动子具有高度的特异性，并可以其作为启动子，DNA作为模板体外合成正义链RNA。线性质粒、PCR产物双链DNA均可作为T7 RNA聚合酶的底物模板。
高效T7 RNA聚合酶经电子重构架及库筛选，与Wild型相比，该酶的DNA模板结合区域亲和力更高，使其具有持续合成能力，从而获得更高的产量，并易于长片段RNA的合成。该酶识别T7 promoter（TAATACGACTCA CTATA G G）以倒数第二个G碱基为起点开始转录，转录长度可达5000nt以上。
- 制备放射标记的RNA探针。
- 合成用于体外翻译的RNA。
- 合成用于结构、加工和催化性能研究的RNA。
- 合成RNA反义链，调控基因表达。
在标准反应体系下，37℃ 1小时内将1nmol的ATP掺入酸不溶物所需要的酶量定义为一个活性单位。
| 组分 | 规格 |
| T7 RNA Polymerase(100U/μL) | 100μL |
| 10×T7 TransBuffer | 500μL |
保存：-20℃，避免反复冻融，有效期2年。
10mM Tris-HCl，0.1M NaCl，1mM DTT，0.1mM EDTA，50% Glycerol，0.01% (w/v) Triton X-100，pH7.5。
1×T7 TransBuffer：
40mM Tris(pH7.8)，10mM NaCl，6mM MgCl2，2mM Spermidine HCl，10mM DTT。
70℃加热10分钟。
| 名称 | 货号 |
| rNTP Mixture(25mM each) | MT3304 |
| RNase Inhibitor | MT0014 |
| RNase-Free DNase I | MT0090 |
- 使用时如果发现如有白色沉淀析出，37℃温浴5min后使用，不影响性能。
- 质粒DNA的质量影响RNA的量和完整性。质粒DNA的浓度越高，生成RNA的质量越高，质粒模板DNA应该无RNase污染.
- 该酶为高产酶，RNA产量极高，在反应完毕后，通常存在肉眼可见的浑浊状态，其为反应副产物焦磷酸镁，此时表明反应剧烈。在下一步RNA纯化前，可通过短暂离心去除沉淀物，此过程并不丢失RNA。
- 通常转录后RNA产物浓度在2～4μg/μl，因此电泳时，仅需取0.05～0.1μL即可。
- 关于T7启动子序列：（G/C）标示G或C碱基均可。
CAAAT
非必须(TAATACGACTCACTATA)
核心识别序列G (G/C) GNNN..
转录起始序列
- 按下表加入各成分配制反应体系
成分 用量 10×T7 TransBuffer 2μL rNTP Mixture(25mM each) 3.2μL Linearized template DNA 0.5～1μg RNase Inhibitor(40U/μL) 0.5μL Hi T7 RNA Polymerase(100U/μL) 0.5～1μL DEPC-treated Water 至20μL - 37℃孵育2～3h (通常3h，即可获得＞80μg的总产量)。
- 反应完毕后，如需去除模板DNA，加入2U DNase I，37℃处理15min。
- 终止反应：75℃加热10min，或加入2μL 0.5M的EDTA(pH8.0)。
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